Kvantifisering av nukleinsyrer iSpektrofotometrene
Kvantifisering av nukleinsyrer er den mest brukte funksjonen for enspektrofotometeret.Oligonucleotides, enkelt-strandet, double-strandet DNA og RNA kan kvantifiseres i buffere. Absorpsjon toppen av den høyeste absorpsjon toppen av nukleinsyre er 260 nm. Hver nukleinsyre har en annen molekylær sammensetning og derfor har forskjellige omregningsfaktorer. For å måle ulike typer nucleic syrer, velg tilsvarende koeffisientene på forhånd. For eksempel tilsvarer absorbansen av 1OD 50 μg/ml dsDNA, 37 μg/ml ssDNA, 40 μg/ml RNA og 30 μg/ml Olig, henholdsvis. Absorbansen verdien når testen er konvertert over koeffisient å få tilsvarende eksempel konsentrasjonen. Før testing, velge riktig prosedyre, angi volum av lager løsningen og fortynningsmiddel, og teste tomt og prøve løsninger. Men var eksperimentet ikke lett. Ustabil målinger kan være den største hodepinen for forskere. Jo høyere følsomheten av instrumentet, jo større utstilt absorbansen drift.
I faktum, design prinsipp og Arbeidsprinsipp for denspektrofotometertillate absorbansen salgsverdi å endre innenfor et bestemt område, det vil si, instrumentet har en viss grad av nøyaktighet og nøyaktighet. Som Eppendorf Biophotometer nøyaktighet ≤ 1,0% (1A). Resultatene av disse flere tester varierer mellom gjennomsnittet av 1,0% og er alle normale. I tillegg mekanisk-egenskapene til nukleinsyre, pH i bufferen for oppløsning av nukleinsyre, konsentrasjon, etc. må også tas i betraktning: under testen for høyt en konsentrasjon vil også forårsake lesing å drive som TE , som vil sterkt stabilisere lesing. Utvannet konsentrasjonen av prøven er også en ikke-ubetydelig faktor: av uunngåelig små partikler i utvalget, spesielt nukleinsyre prøver. Tilstedeværelsen av disse små partikler forstyrrer test effekten. For å minimere påvirkning av partikler på testresultatene, absorbansen av nukleinsyre er nødvendig for å være på minst 0,1 A og absorbansen er fortrinnsvis 0.1-1,5 A. I dette området, det må være noen bobler i blandingen, og det er uten fjæring i tomt. Ellers drive målingene voldsomt; den samme kolorimetrisk koppen må brukes til å teste tomt og prøven; ellers er konsentrasjon forskjellen for stor. konvertering koeffisient og prøve konsentrasjon enheten er den samme; Cuvette båret av vinduet; volumet av prøven må nå mer enn nødvendig minimum av farge cup, etc.
I tillegg til nukleinsyre konsentrasjonen, denspektrofotometerviser flere svært viktig prosenter samtidig for å indikere renheten av prøven, som A260/A280 forholdet, for å vurdere renheten av prøven, siden absorpsjon toppen av protein er 280 nm. Ren utvalg har en ratio større enn 1,8 (DNA) eller 2.0 (RNA). Hvis forholdet er mindre enn 1,8 eller 2.0, indikerer tilstedeværelse av protein eller fenoliske stoffer. A230 angir at det er noen miljøgifter i utvalget, som karbohydrater, peptider, fenoler, etc. Forholdet mellom ren nukleinsyre A260/A230 er større enn 2.0. A320 oppdager turbiditet løsningen og andre forstyrrelser faktorer. Ren eksempel A320 er vanligvis 0.
Selskapet spesialiserer seg på salg avSpektrofotometrene, velkommen kunder som har behov for å se og kjøpe, vil vi gi deg med oppriktig service og kvalitet, i tillegg til lavere priser.
E-post:info@sumerlab.com